IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探 |
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引用本文: | 李沂,李昌,杜寿文,王茂鹏,朱羿龙,刘存霞,秦艳青,金宁一. IFITM2的克隆表达及其抗病毒作用初探[J]. 中国免疫学杂志, 2013, 29(6) |
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作者姓名: | 李沂 李昌 杜寿文 王茂鹏 朱羿龙 刘存霞 秦艳青 金宁一 |
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作者单位: | 1. 吉林农业大学动物科技学院,长春,130118 2. 军事医学科学院军事兽医研究所,省部共建人兽共患病预防与控制重点实验室,长春130122 |
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基金项目: | 973计划前期研究专项课题,中国博士后科学基金面上项目 |
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摘 要: | 目的:构建含有ifitm2基因的重组质粒,在人胚肾HEK293T细胞中表达,并验证IFITM2蛋白的抗病毒作用.方法:参照Genbank ifitm2基因序列,设计上下游引物,通过RT-PCR技术扩增ifitm2基因,并将扩增产物连接至pMD18-T-simple载体上,目的基因测序正确后进一步亚克隆至真核表达载体pVAX1上,转染HEK293T细胞,通过RT-PCR,蛋白免疫印迹(Western blot)和激光共聚集显微镜(LCSM)验证外源基因在细胞内的表达情况.同时HEK293T细胞过表达IFITM2蛋白,利用含有EGFP基因的VSV-G假膜病毒感染细胞,通过Western blot检测IFITM2蛋白对病毒的抑制作用.结果:成功获得ifitm2基因,测序正确,将其连接到pVAX1载体中,经酶切鉴定,证明含有ifitm2基因的重组质粒构建成功,Western blot和LCSM分析表明,目的基因能够在HEK293T细胞中表达,且呈广泛分布.过表达IFITM2蛋白后,荧光蛋白分析表明,该蛋白对病毒感染具有一定的抑制作用.结论:成功构建了含有ifitm2基因的重组真核表达质粒,该质粒可以在真核细胞中得到有效表达,且对VSV-G假膜病毒具有一定抑制作用,该研究为进一步探讨IFITM2蛋白的抗病毒作用及其分子机制提供了实验及理论基础.
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关 键 词: | IFITM2 克隆表达 抗病毒作用 |
Cloning and expression of IFITM2 gene and preliminary study on its antiviral activity |
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Abstract: |
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Keywords: | IFITM2 Clone and expression Antiviral activity |
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