LC-MS/MS研究新型酪氨酸酶抑制剂UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学

 目的 建立并验证测定大鼠肝微粒体孵育液中UP302含量的高效液相色谱-串联质谱法,研究UP302在大鼠肝微粒体中代谢的酶动力学。方法 经大鼠肝微粒体孵育的UP302样品,经色谱柱分离,电喷雾离子化负离子检测,扫描方式为选择反应监测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 301.1→135.2（UP302）和m/z 252.9→132.0（内标大豆苷元）。考察不同孵育时间、底物浓度和微粒体浓度对UP302代谢的影响,确定最佳反应条件。结果 标准曲线线性范围为0.1～20 μmol·L-1,线性关系良好,日内日间准确度在86.42%～112.59%,日内日间精密度均小于9.09%,回收率在100.50%～109.91%之间。确定了酶动力学参数,最大反应速度V_max为196.08 μmol·L-1·min-1·g-1 ,米氏常数K_m为14.98 μmol·L-1,内在代谢清除率CL_int为13.09 mL-1·min-1·g-1。结论 该检测方法快速、专属、灵敏度高,可满足酶动力学检测要求。