四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰，干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型，将24只C57BL/6小鼠，随机分为4组，每组6只，分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1），通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平；免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平；观察各组小鼠肿瘤数量，称量肝脏质量；检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力，分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较，模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）；p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）；p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）；IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）；肝脏质量显著升高（P<0.01）；小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01），气盛衰度显著下降（P<0.01）。
与模型组小鼠比较，四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05， P<0.01）；p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05，P<0.01）；p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）；四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01），直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01），小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05），小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05，P<0.01），气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展，该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平，增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰，抑制p65的磷酸化修饰，最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。