| 小鼠白细胞介素15慢病毒载体的构建和表达 |
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| 引用本文： | 胡博,林丹丹,张胤晟,包光明,单琳,赵昀,刘海燕. 小鼠白细胞介素15慢病毒载体的构建和表达[J]. 南通医学院学报, 2010, 30(2): 79-82,85,F0002 |
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| 作者姓名： | 胡博 林丹丹 张胤晟 包光明 单琳 赵昀 刘海燕 |
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| 作者单位： | 1. 苏州大学医学部肿瘤细胞与分子免疫学实验室,苏州,215123
2. 苏州大学第一附属医院江苏省血液研究中心 |
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| 基金项目： | 教育部博士点基金(K5134832);;江苏省六大高峰人才基金(B134801);;江苏省研究生创新基金(ZY320911) |
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| 摘 要： | 目的：克隆小鼠白细胞介素15（IL-15）基因,并构建可表达小鼠IL-15基因的重组慢病毒。方法：根据小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭载体相应的酶切位点设计合成PCR引物;提取小鼠脾脏总RNA,逆转录PCR扩增小鼠IL-15基因的编码区;克隆小鼠IL-15基因的编码区,并进行基因测序;构建含有IL-15基因的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG,Western Blot检测IL-15基因在MEG细胞中的表达。结果：含有小鼠IL-15基因编码区的慢病毒穿梭质粒构建成功,基因测序结果完全正确;含有小鼠IL-15基因的慢病毒载体包装成功;所得病毒上清可成功感染MEG细胞,流式细胞术检测阳性率可达98%;Western Blot结果证明小鼠IL-15基因在MEG细胞中正常表达。结论：成功扩增、克隆了小鼠IL-15基因,并建立其慢病毒表达系统,从而为后续的基础及应用研究工作奠定了基础。
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| 关 键 词： | 白细胞介素15 慢病毒载体 小鼠 |
Construction and expression of murine IL-15 gene lentiviral vector |
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| HU Bo ,LIN D,an ,ZHANG Yinsheng ,et al. Construction and expression of murine IL-15 gene lentiviral vector[J]. ACTA Academiae Medicinae Nantong, 2010, 30(2): 79-82,85,F0002 |
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| Authors: | HU Bo LIN D an ZHANG Yinsheng et al |
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| Affiliation: | 1Laboratory of Cellular and Molecular Tumor Immunology/a>;Medical College of Soochow University/a>;Suzhou 215123/a>;2Cyrus Tang Hematology Center/a>;Jiangsu Institute of Hematology/a>;the First Affiliated Hospital of Soochow University |
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| Abstract: | Objective:The purpose of this research was to construct a lentivira vector containing murine IL-15 gene,and detect the expression of IL-15.Methods:The primers were designed according to the IL-15 gene sequence and the structure of lentiviral vector.Total RNA of mice splenocytes was extracted,and the coding sequence of IL-15 was amplified by RT-PCR.The PCR product was cloned and sequenced correctly.IL-15 gene was subcloned into the transfer plasmid of the lentivirus system,which was transfected together with... |
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| Keywords: | Interleukin 15 Lentiviral vector Mouse |
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