CD40信号通过TNFRⅠ途径抑制肺癌细胞增殖的研究

背景与目的：CD40活化信号可抑制多种肿瘤细胞体外生长，但其分子机制尚不明确，本研究旨在探讨激发CD40信号对肺癌细胞株NCI—H460、A549的增殖及肿瘤坏死因子受体（tumor necrosis factor receptor，TNFR）、膜型TNF-α（mTNF-α）表达的影响及相关机制。方法：免疫荧光标记和流式细胞术检测肺癌细胞表面CD40的表达以及激发CD40对细胞表面TNFR和mTNF-α表达谱的影响：Western blot检测激发CD40对细胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表达的影响；采用四氮唑盐（MTT）比色法抗体中和实验分析阻断TNFRI及TNF-α对CD40激发效应的影响：酶联免疫吸附（ELISA）法检测激发CD40对肺癌细胞培养上清中可溶性TNF-α（mTNF-α）含量的影响。结果：（1）肺癌细胞株NCl-H460、A549表面CD40表达分别为（89．0±3．2）％、（62．2±4．5）％。（2）免疫荧光和流式细胞术示，激发NCl—H460和A549细胞表面CD40分子48h后．其表面TNFRⅠ表达率分别为（36．2±4．6）％、（38．5±5．9）％，较对照组分别为（7．2±1．9）％、（15．2±3．1）％明显升高（P〈0．05）；而其表面TNFRⅡ表达率分别为（5．8±1．2）％、（18．0±1．6）％，较对照组分别为（38．8±4．3）％、（58．1±3．6）％明显降低（P〈0．05）；其表面TNF-α表达率分别为（7．0±0．9）％、（8．7±1．1）％，较对照组分别为（15．0±2．1）％、（26．5±3．2）％也明显降低（P〈0．05）。（3）Westernblot示，激发CD40可使NCl—H460和A549细胞TNFRI蛋白表达增强，TNFRII蛋白表达减弱．而mTNF-α蛋白表达无明显变化。（4）CD40激发前后肺癌细胞培养上清中未检测到sTNF-α的存在。（5）激发CD40能明显抑制NCl-H460、A549细胞的增殖（P〈0．05），而阻断TNFRⅠ后CD40信号的细胞增殖抑制效应消失。（6）阻断TNF-α亦可明显抑制两肺癌细胞株增殖（P〈0．05），而同时激发CD40未见两者?