用竞争结合分析法测^125I—BAC5的亲和力常数Ka值

放射性核素标记单克隆抗体(McAb)的临床应用愈来愈受人重视。核素标记抗体在应用前有许多质量参数应该确定,其中抗体的亲和力常数Ka值就是一项重要指标。我们用竞争结合法测定Mcab的Ka值,取得满意结果,现报告如下。 材料和方法 一、材料: (一)抗低分化鼻咽癌单克隆抗体BAC5:复苏抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞株BAC5,培养至对数生长期,以3.5×10~5个细胞/0.5ml注入6～8周龄BALB/c经产母鼠腹腔,10～14天处死小鼠取腹水经硫酸铵粗提后,再经DEAE-Sepharose 6B柱层析进一步纯化,所获单抗BAC5的纯度为93％,属IgG2a亚类,用直线外推细胞结合分析法测免疫活性分数为86.8％。 (二)无截体(125)~Ⅰ(-Na~(125)Ⅰ):北京原子能研究院提供,用Iodogen法标记BAC5,(125)~Ⅰ标记率为88.6％。标记BAC5的放化纯度92.8％,比活度83MBq/mg,比浓度33.2MBq/ml。 (三)靶细胞为低分化鼻咽癌上皮细胞CNE-2,复苏后在5％CO_2培养箱培养至对数生长期使用。