| 人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 郭雪艳,时永全,翟惠虹,孙力,刘理礼,韩霜,雷婷,樊代明. 人核糖体蛋白S13的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2007, 23(4): 363-366 |
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| 作者姓名： | 郭雪艳 时永全 翟惠虹 孙力 刘理礼 韩霜 雷婷 樊代明 |
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| 作者单位： | 第四军医大学肿瘤生物学国家重点实验室,西京医院消化病研究所,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;第四军医大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 目的克隆人核糖体蛋白S13(ribosomal protein S13,RPS13)cDNA全长,构建原核表达质粒,诱导表达、纯化RPS13蛋白并制备其多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从胃癌多药耐药细胞SGC7901/VCR中扩增出RPS13的cDNA全长,利用DNA重组技术构建重组原核表达载体pET-28a( )-RPS13,双酶切及测序鉴定。将重组载体转化入大肠杆菌BL21中,筛选抗性克隆并经DNA测序证实。IPTG诱导融合蛋白的表达,利用镍离子亲和层析柱提纯融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的融合蛋白His-RPS13免疫BALB/c小鼠,ELISA法测定抗体效价,饱和硫酸铵沉淀法纯化抗体,Western blot检测抗体活性。结果RT-PCR扩增片段与预计目的基因片段大小一致;双酶切鉴定表明,重组表达载体pET-28a( )-RPS13构建成功,DNA测序结果显示所获基因序列与GenBank中收录完全相同。IPTG诱导3h后,经SDS-PAGE检测显示在Mr19000处出现一新生条带,与预计的融合白大小一致;利用抗His标签的抗体进行Western blot,结果证实融合蛋白表达成功。其免疫血清经Western blot证实可特异性的识别蛋白RPS13。结论成功地获得了RPS13的编码基因序列,并获得了纯化的RPS13蛋白质,为制备RPS13的单克隆抗体、进一步研究RPS13在肿瘤中的作用奠定了基础。
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| 关 键 词： | 核糖体蛋白S13 原核表达 融合蛋白 纯化 多克隆抗体 |
| 文章编号： | 1007-8738（2007）04-0363-04 |
| 修稿时间： | 2006-09-19 |
Prokaryotic expression and purification of RPS13 and prepartion of polyclonal antibody against RPS13 |
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| GUO Xue-yan,SHI Yong-quan,ZHAI Hui-hong,SUN Li,LIU Li-li,HAN Shuang,LEI Ting,FAN Dai-ming. Prokaryotic expression and purification of RPS13 and prepartion of polyclonal antibody against RPS13[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2007, 23(4): 363-366 |
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| Authors: | GUO Xue-yan SHI Yong-quan ZHAI Hui-hong SUN Li LIU Li-li HAN Shuang LEI Ting FAN Dai-ming |
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| Affiliation: | National Key Laboratory of Cancer Biology, Institute of Digestive Diseases, Xijing Hospital, Fourth Military Medical University, Xi'an 710032, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ribosomal protein S13 prokaryotic expression recombined protein prurification polyclonal antibody |
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