NUCB2 siRNA对肝细胞胰岛素信号通路及细胞凋亡的影响

目的探讨靶向NUCB2基因特异性siRNA对大鼠肝细胞IAR20 NUCB2基因沉默效应、对大鼠肝细胞胰岛素信号通路及细胞凋亡的影响。方法构建合成靶向NUCB2基因的siRNA,转染IAR20细胞。Western blot检测PEPCK、G-6-Pase、InsR、IRS-1、Akt的蛋白含量及其磷酸化水平。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,使用RT-PCR检测p53及caspase3 mRNA水平。结果转染siRNA 48 h后,IAR20细胞NUCB2表达明显降低(P均0.05)。PEPCK、G-6-Pase蛋白及mRNA表达量明显增加,同时IR、IRS-1、AKT的磷酸化表达降低(P0.01或P0.05)。IAR20细胞凋亡明显增加,p53及caspase 3 mRNA表达及cleaved caspase 3明显增加(P0.01或P0.05)。结论 NUCB2特异性siRNA能通过下调IR/IRS-1/Akt信号通路加重大鼠肝细胞胰岛素抵抗,并能够通过上调caspase 3及p53表达增加细胞凋亡。