衣霉素对顺铂诱导人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 探讨内质网应激在顺铂诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用.方法 取人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,实验分为衣霉素(5mg/L)组、顺铂(6mg/L)组、衣霉素(5mg/L)与顺铂(6mg/L)联合给药组、阴性对照组,处理12h后采用MTT法观察细胞生长情况,Hoechst荧光染色检测细胞核形态的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-4活化情况,间接免疫荧光法检测蛋白质二硫键异构酶(PDI)、磷酸化H2AX组蛋白(γ-H2AX)的表达变化.结果 MTT法检测显示衣霉素组、顺铂组、联合给药组和阴性对照组的细胞增殖抑制率分别为2.65％±2.71％、19.60％±4.34％、44.69％±7.07％、0,除衣霉素组与对照组外其余各组间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).Hoechst染色显示,阴性对照组荧光较弱且均匀,顺铂组和联合给药组部分HeLa细胞核明显变小并呈现致密强荧光,部分细胞核呈碎块状,联合给药组核碎裂细胞比例(44.5％±5.1％)显著高于顺铂组(22.7％±3.9％,P＜0.05).免疫印迹法检测显示,顺铂组裂解Caspase-3、Caspase-4蛋白表达明显高于对照组和衣霉素组,但显著低于联合给药组(P＜0.05).间接免疫荧光法检测显示:顺铂组胞质内无PDI表达,荧光较弱；衣霉素组、顺铂组PDI蛋白均呈颗粒状,分布于核周,荧光较强；联合给药组大部分细胞内PDI呈现明显强荧光,荧光强度明显高于衣霉素组和顺铂组.阴性对照组和衣霉素组细胞核内未见γ-H2AX表达,而顺铂组与联合给药组均可见部分细胞核内出现明显绿色荧光,但两组无明显差异.结论 衣霉素可增加内质网应激水平,促进顺铂诱导HeLa细胞发生凋亡.

Effect of tunicamycin on cisplatin induced apoptosis of HeLa cells