人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达 |
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引用本文: | 卢俊,徐世元,崔睿,张庆国,雷洪伊.人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达[J].南方医科大学学报,2011,31(1):86-89. |
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作者姓名: | 卢俊 徐世元 崔睿 张庆国 雷洪伊 |
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作者单位: | 南方医科大学珠江医院麻醉科; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30972843)~~ |
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摘 要: | 目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。
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关 键 词: | 局麻药 RNAi干扰 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2 |
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