人肾间质纤维母细胞培养及血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达

目的：体外培养人肾间质纤维母细胞（hRIF)并用腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）。方法：用肾穿刺活检法取慢性肾小球肾炎病人肾组织，以常规组织块贴壁法培养hRIF；构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R)，体外转染hRIF；用RT-PCR方法检测AT2RmRNA表达，免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2R蛋白表达，流式细胞仪检测AT2R表达0率，同时检测AT1R的表达变化。结果：用肾活检组织成功培养出hRIF，构建的AdCMV-AT2R体外转染培养hRIF表达率为90.57%，以免疫组化、免疫印迹和RT-PCR检测AT2R表明，转染后AT2R表达明显增强。并随表达时间延长而增加，48h为表达峰值。AT2R转染表达不影响AT1R表达，结论：腺病毒载体可较高效率介导AT2R在hRIF的转染表达，ATIR表达不受其影响。转染表达AT2R的hRIF可作为研究AngⅡ在肾间质纤维化中作用的良好细胞模型。