| AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 李青春,梁淑娟,王雪净,刘艳艳,王焕芹,张素华.AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(7). |
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| 作者姓名： | 李青春 梁淑娟 王雪净 刘艳艳 王焕芹 张素华 |
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| 作者单位： | 潍坊医学院免疫学教研室,山东省高校免疫学重点实验室,山东,潍坊,261042 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，山东省卫生高层次人才专项基金，国家教育部科学技术研究项目重点项目，山东省科技攻关计划 |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 并检测其在真核细胞内的表达.方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因, 将其克隆至pIRES2-EGFP载体, 构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因, 克隆至pafpIRES2-EGFP, 进行酶谱分析及DNA序列测定.利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞, 倒置相差荧光显微镜下观察, RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化.结果:SOE-PCR方法获得长度为537 bp的AFP和ECMV嵌合基因, 克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP.PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP, 获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 细胞转染分析证实, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达, RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高.结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β, 该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β.
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| 关 键 词： | IL-1β AFP启动子 组织特异性 肝癌 |
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