p16基因对舌鳞癌细胞生物学特性影响的研究

ｐ16基因是一个多种肿瘤抑制基因 ,其编码蛋白为周期依赖性激酶 4(ＣＤＫ4)的抑制因子 ,能阻止ＣＤＫ4与细胞周期素Ｄ结合 ,从而使细胞周期阻滞在Ｇ1期1] 。我们为了探讨引入野生型ｐ16基因后口腔鳞癌细胞生物学的变化 ,构建了ｐ16基因真核表达质粒 ,并于体外转染ｐ16基因产物缺乏的舌鳞癌细胞ＴＳＣＣａ中 ,探索ｐ16基因治疗口腔鳞癌的可行性。1 材料 :ｐｃＤＮＡ3真核表达质粒 ;人舌鳞癌细胞系ＴＳＣＣａ ;ｐ16的ＲＴ ＰＣＲ引物顺序 :正义链 :5′ ＧＣＧＣＧＧＡＴＣＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＴＣＧＧＣＴＧＡＣＴＧＧ 3′ ;反义链 :5′ ＧＣＧＣＧＡＡＴＴＣＴＣＡＡＴＣＧＧＧＧＡＴＧＴＣＴＧＡＧＧＧ 3′。2 .方法 :(1)ｐｃＤＮＡ ｐ16真核表达质粒的构建 :常规提取ｐｃＤＮＡ3质粒ＤＮＡ ,ＢａｍＨ1和ＥｃｏＲ1酶切 ;提取人正常口腔粘膜总ＲＮＡ ;ＲＴ ＰＣＲ扩增ｐ16全长ｃＤＮＡ ;ＢａｍＨ1和ＥｃｏＲ1酶切 ,纯化后和线性ｐｃＤＮＡ3进行连接反应 ,筛选阳性克隆 ,ＢａｍＨ1和ＥｃｏＲ1酶切鉴定定向克隆的重组质粒ｐｃＤＮＡ3 ｐ16。(2 )ｐｃＤＮＡ3和ｐｃＤＮＡ3 ｐ16转染ＴＳ...