双环醇对组成型雄甾烷受体和孕烷X受体介导的CYP3A4和CYP286转录的调控

目的：构建pGL4．17-CYP3A4启动子嵌合报告基因表达载体，研究双环醇是否通过活化组成型雄甾烷受体（Constitutive Androstane Receptor，CAR）和孕烷X受体（pregnane Xreceptor．PXR）影响CYP3A4及CYP286的转录。方法：以提取的人肝组织基因组DNA为模板，应用RT-PCR技术，扩增获得CYP3A4启动子的近端启动序列（-362／＋53）和远端调控序列（-7836／-7208），并连接到pGEM-T载体，测序正确后将目的基因片段先后插入至pGL4．17报告基因表达载体。将hPXR、hCAR表达载体分别与CYP3A4及CYP286报告载体共转染HepG2细胞，利用双荧光素酶报告基因系统检测CYP3A4及CYP286均具有启动活性后，双环醇分别与转染hPXR和CYP3A4、hCAR和CYP3A4、hCAR和CYP286的HepG2细胞温孵24h后，收获细胞并裂解，检测活性以分析双环醇对CYP3A4及CYP286的转录调节途径。结果：获得pGL4．17-CYP3A4启动子嵌合报告基因表达载体，经酶切鉴定及核酸序列测定证实该报告基因表达载体构建成功。双环醇主要通过活化CAR受体途径，调控CYP3A4和CYP286的转录，而PXR受体途径较少参与。