|
|||||
|
|
| 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达 | |
| 引用本文： | 邱宗文,张锡林,王英,段文元.斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因pET22b载体的构建及表达[J].中国病原生物学杂志,2005,18(3):187-191. |
| 作者姓名： | 邱宗文 张锡林 王英 段文元 |
| 作者单位： | 1. 第三军医大学附属新桥医院检验科,重庆,400038 2. 第三军医大学基础部病原生物学教研室,重庆,400038 3. 第三军医大学基础部分子遗传学教研室,重庆,400038 |
| 摘 要： | 目的构建含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的pET22b(+)表达载体,利用SDSPAGE和免疫印迹分析阳性克隆菌株的诱导表达及其表达产物的免疫原性。方法提取斯氏狸殖吸虫成虫总RNA,经RTPCR扩增及T/A克隆后测定其核苷酸序列并进行序列查询与比对。根据已获得的序列和pET22b(+)载体的内切酶位点信息设计引物并再次进行T/A克隆,阳性克隆质粒经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段与pET22b(+)载体连接并转化至BL21(DE3)菌株,收集经IPTG诱导表达后的菌液进行SDSPAGE和免疫印迹分析。结果SDSPAGE显示,经诱导表达的阳性克隆菌株、未经诱导菌株与空载体菌株之间的蛋白带型未见明显差异,但经诱导表达的阳性克隆菌株的22ku蛋白条带比另两菌株明显,免疫印迹证实,该蛋白条带可与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生强阳性反应。结论成功构建了含斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因的pET22b(+)载体,经诱导表达的融合蛋白能与斯氏狸殖吸虫成虫ES抗原免疫豚鼠血清发生较强的免疫反应。 |
| 关 键 词： | 斯氏狸殖吸虫 半胱氨酸蛋白酶 pET22b栽体 |
| 文章编号： | 1001-6627(2005)03-0187-05 |
| 修稿时间： | 2004年9月11日 |
CONSTRUCTION OF pET22b VECTOR EXPRESSING THE CYSTEINE PROTEINASE OF ADULT WORM OF PAGUMOGONIMUS SKRJABINI |
|
| QIU Zong-wen,ZHANG Xi-lin,WANG Ying,DUAN Wen-yuan.CONSTRUCTION OF pET22b VECTOR EXPRESSING THE CYSTEINE PROTEINASE OF ADULT WORM OF PAGUMOGONIMUS SKRJABINI[J].Journal of Pathogen Biology,2005,18(3):187-191. | |
| Authors: | QIU Zong-wen ZHANG Xi-lin WANG Ying DUAN Wen-yuan |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ | |