大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统的缺陷突变株对HeLa细胞黏附能力的影响

目的：构建O157∶H7 EDL933菌株Ⅲ型分泌系统（ T3SS）缺陷突变株ΔescR，感染HeLa细胞后检测其黏附能力。方法通过重叠延伸PCR扩增出中间为卡那霉素抗性基因，两侧为escR基因上下游同源序列的重组线性DNA片段，电击转入含pKD46的EDL933感受态细胞中，escR基因被kan基因替换而缺失。绘制野生株与ΔescR生长曲线，并利用免疫荧光观察两株细菌对HeLa细胞的黏附能力。结果获得缺陷突变株ΔescR，相较于野生株，该突变株在DMEM（10％FBS）培养基中生长速度以及对HeLa细胞的黏附能力明显下降。结论 T3SS结构蛋白escR基因的缺失破坏了EDL933 T3SS的形成，影响了该菌株黏附能力，其构建为后续研究T3SS奠定了基础。