依达拉奉对过氧化氢刺激神经细胞的保护作用及机制研究

目的 探讨依达拉奉对神经元的保护作用及其保护机制.方法 提取胎龄16 ～ 18 d的孕大鼠皮层组织,消化、离心后培养,鉴定神经元细胞纯度90％以上.实验共分为3组:空白对照组、过氧化氢(H2O2)处理组(300 μmol/L刺激0.5、2、6及12 h),依达拉奉预处理组(刺激前预防性应用500 μmol/L保护30 min,分组同H2O2处理组).电镜观察线粒体形态的变化,流式细胞仪检测凋亡细胞的比率,免疫印迹及免疫沉淀检测凋亡关键蛋白的活性及蛋白间的关系.结果 相比依达拉奉预处理组,H2O2处理组相同时间点的线粒体明显呈水泡样肿胀变及空泡样变.H2O2处理组刺激后0.5、2、6及12h细胞凋亡比率分别为14.40％±1.23％、45.50％±2.81％、56.40％±3.53％、62.50％±4.23％；与空白对照组比较神经元凋亡明显增加(F=274.8,P＜0.01).依达拉奉预处理组相应时间点的细胞凋亡比率分别为0.90％±0.07％、1.10％±0.08％、3.50％±1.90％、12.60％±1.10％；与H2 02处理组比较明显降低(F=362.7,P＜0.01).刺激0.5h后,磷酸化c-Jun氨基端激酶(p-JNK)、细胞质中细胞色素C、线粒体膜上B细胞白血病-淋巴瘤-2相关X蛋白(BAX)表达水平开始明显升高,直至12 h时达到顶峰；与此同时,细胞质中B细胞白血病-淋巴瘤-2关联死亡蛋白(BAD)、磷酸化BAD、BAX和14-3-3水平表现为持续性降低,而这些改变在依达拉奉预处理组均被抑制.结论 作为一种自由基清除剂,依达拉奉可能通过抑制JNK的活性、抑制BAD与14-3-3分离及抑制BAX选择性地由细胞质向线粒体移位来保护神经细胞.

The study of the protective effect and its mechanism of Edaravone to neurons with hydrogen peroxide stimulated