人端粒酶逆转录酶基因转染人髓核细胞的安全性研究

目的评价人端粒酶逆转录酶（humantelomerasereverse transeriptase，hTERT）基因转染对人椎间盘髓核细胞“安全性”的影响．方法将构建好的重组腺相关病毒人端粒酶逆转录酶基因（recombinantadeno—associatedvirusvee—tor—nlediatedhTERTgene，rAAV—hTERT）按感染复数（muhiplieityofinfection，MOI）10^5v．g每细胞转染体外培养二代髓核细胞。没立rAAV—hTERT转染组，AAV空病毒转染组及未转染组；利用RT—PCR及Western—blot检测转染后hTERT基闪的表达；对体外培养120d的细胞进行染色体核型分析；将3组细胞（100μL，3×10^7／mL）分别注入裸鼠腋下检测其成瘤性，以人Hela细胞为阳性成瘤实验对照。结果成功检测出rAAV—hTERT转染髓核细胞后hTERT轼因的表达；G-带核型分析未见染色体结构异常克隆；3组细胞均未观察到裸鼠体内肿瘤形成。结论rAAV—hTERT能成功转染人惟问盘髓核细胞并IF确表达，rAAV—hTERT转染髓核细胞在有限的体外培养过程中是安全的，可为进一步的在体研究提供安伞性证据.