| 摘 要： | 目的筛选血瘀质、非血瘀质非创伤性股骨头坏死(NONFH)患者与健康人外周血中差异表达的miRNA,建立miRNA表达谱,分析其生物学信息,为血瘀质NONFH的防治提供依据。方法选取血瘀质、非血瘀质NONFH患者各10例(NONFH组)和健康志愿者8例(正常组),采用RT-PCR检测其血浆miRNA相对表达量,筛选差异表达的miRNA。应用实时荧光定量PCR对差异表达的hsa-miR-365a-3p、hsa-miR-483-3p进行验证。采用TargetScan、microRNAorg、PITA在线数据库对差异miRNA进行靶基因预测,并进行靶基因生物信息学分析。结果与正常组比较,NONFH组有差异表达的miRNA50个,其中上调21个,下调29个。与非血瘀质NONFH组比较,血瘀质NONFH组有差异表达的miRNA 33个,其中上调10个,下调23个。经筛选,最终确定血瘀质NONFH差异表达miRNA 5个。实时荧光定量PCR验证结果与miRNA芯片结果相符。3个在线数据库共筛选出交集靶基因11个,仅表达下调miRNA中hsa-miR-365a-3p检出交集靶基因11个,余未检测出交集靶基因。GO分析显示,差异表达miRNA主要与受体结合、蛋白及酶的活性有关。Pathway分析显示,血瘀质NONFH差异表达miRNA靶基因主要富集于轴突导向、Rap1、赖氨酸降解、Fc epsilon RI、甘油磷脂代谢、T细胞受体、血小板活化、成骨细胞分化等多个信号通路。结论血瘀质NONFH差异表达miRNA可能通过调控Rap1、赖氨酸降解、甘油磷脂代谢、血小板活化、成骨细胞分化、Ras、PI3K-Akt等信号通路参与NONFH发生发展过程。
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