| 小鼠Sema3A基因过表达慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 作者姓名： | 阎秀林 陈钰文 金婕 朱玉 王健 张扬 卢利 |
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| 作者单位： | 辽宁省口腔医学研究所口腔正畸学研究室,中国医科大学附属口腔医院正畸科;辽宁省口腔医学研究所口腔颌面外科学研究室,中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科 |
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| 基金项目： | 辽宁省科技厅(2012225015) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠Sema3A基因过表达慢病毒载体。方法通过体外合成小鼠全长Sema3A c DNA,采用Gateway技术将其基因插入到p Down-m Sema3A-IRES/EGFP质粒中,再交换重组获得重组质粒p LV/EXPNZ-puro-m Sema3A-IRES/EGFP,经过测序鉴定后,包装与浓缩慢病毒载体p LV(Exp)-Puro-CMV-m Sema3A-IRES/EGFP,最后重组慢病毒载体转染293T细胞获得病毒液。结果重组慢病毒载体11 538 bp,测序结果证实Sema3A基因共2 319 bp正确插入带有EGFP的载体中,成功构建小鼠Sema3A基因过表达载体。结论成功构建小鼠慢病毒载体p LV(Exp)-Puro-CMV-m Sema3A-IRES/EGFP,为该基因在特定细胞内过表达株的筛选奠定基础。
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| 关 键 词： | Sema3A 慢病毒载体 |
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