| 抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析 |
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| 引用本文： | 安萌,王志强,朱华亭,孔永,王婧,沈立军,韩莲花,夏永洁,邱玉华. 抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(2): 178-181 |
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| 作者姓名： | 安萌 王志强 朱华亭 孔永 王婧 沈立军 韩莲花 夏永洁 邱玉华 |
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| 作者单位： | 苏州大学医学部免疫学系,江苏苏州,215123 |
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| 基金项目： | 科技部科技重大专项(2009ZX09103-705);苏州市科技计划项目(SYS201104) |
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| 摘 要： | 目的 构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能.方法 从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞.经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化.流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应.MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响.结果 获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体.CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0％、72.3％和80.5％.CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3％.结论 成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV).该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性.
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| 关 键 词： | CD86 单链抗体 真核表达 |
Gene cloning,expression and binding activity of anti-CD86 scFv |
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| AN Meng,WANG Zhiqiang,ZHU Huating,KONG Yong,WANG Jing,SHEN Lijun,HAN Lianhua,XIA Yongjie,QIU Yuhua. Gene cloning,expression and binding activity of anti-CD86 scFv[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2013, 29(2): 178-181 |
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| Authors: | AN Meng WANG Zhiqiang ZHU Huating KONG Yong WANG Jing SHEN Lijun HAN Lianhua XIA Yongjie QIU Yuhua |
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| Affiliation: | Department of Immunology,Medical College,Soochow University,Suzhou 215123,China |
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