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| 免疫亲和质谱技术鉴定抗血管性血友病因子单克隆抗体SZ-125的抗原表位 | |
| 引用本文： | 李雪美,王富强,沈飞,赵益明,江淼. 免疫亲和质谱技术鉴定抗血管性血友病因子单克隆抗体SZ-125的抗原表位[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2013, 29(3): 284-286,291 |
| 作者姓名： | 李雪美 王富强 沈飞 赵益明 江淼 |
| 作者单位： | 1. 苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所卫生部血栓与止血重点实验室,江苏苏州,215006 2. 南京医科大学,江苏南京,210003 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(81270593,81100347) |
| 摘 要： | 目的 应用免疫亲和分离与质谱分析技术,结合合成肽法和氨基酸定点诱变技术,鉴定抗血管性血友病因子(vWF)单克隆抗体(mAb) SZ-125的抗原表位.方法 采用胰蛋白酶水解vWF A3区蛋白,产生一系列肽段,利用固定在琼脂糖珠上的SZ-125与其发生免疫亲和反应.用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对抗原决定簇肽段-抗体复合物进行分析.用人工合成分析得到的氨基酸序列并对其中的重要氨基酸位点进行了原位点突变.合成蛋白及突变蛋白均验证了其与抗体SZ-125间的结合力.结果 与SZ-125结合部位即连续表位的肽段为1001 EGGPSQIGDALGFAVR1016.免疫分析证实,合成肽段NH2-EGGPSQIGDALGFAVR-COOH可以与SZ-125结合.进一步通过定点诱变技术,分析得到决定抗原-抗体结合的关键氨基酸为E1001、F1013、V1015、R1016.结论 运用免疫亲和质谱、肽段合成、氨基酸定点突变等手段,精确定位了mAbSZ-125所结合的具体氨基酸位点. |
| 关 键 词： | 单克隆抗体 血管性血友病因子 抗原表位 质谱分析 |
Identification of the epitope of von Willebrand factor recognized by monoclonal antibody SZ-125 with immune-affinity mass spectrometry |
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| LI Xuemei,WANG Fuqiang,SHEN Fei,ZHAO Yiming,JIANG Miao. Identification of the epitope of von Willebrand factor recognized by monoclonal antibody SZ-125 with immune-affinity mass spectrometry[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2013, 29(3): 284-286,291 | |
| Authors: | LI Xuemei WANG Fuqiang SHEN Fei ZHAO Yiming JIANG Miao |
| Affiliation: | 1* 1The First Affiliated Hospital of Soochow University,Jiangsu Institute of Hematology,Key Laboratory of Thrombosis and Haemostasis,Ministry of Health,Suzhou 215006;2Nanjing Medical University,Nanjing 210003,China |
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