HLA-DPA1和-DPB1基因第2、第3外显子同步测序分型的研究

目的:建立可靠的HLA-DPA1和-DPB1基因第2、第3外显子同步测序分型的方法。方法:采用一对位点特异性引物扩增HLA-DPA1基因的第2外显子、第2内含子、第3外显子及其两翼的部分内含子序列,采用2对位点特异性引物扩增HLA-DPB1目的基因片段:第1对引物扩增HLA-DPB1基因第2外显子及两翼的部分内含子序列,第2对引物扩增HLA-DPB1基因第3外显子及两翼的部分内含子序列。PCR产物经核酸外切酶和碱性磷酸酶纯化,用本文的测序引物分别对HLA-DPA1和-DPB1第2、第3外显子进行双向测序。纯化的测序反应产物,经ABI 3730测序仪电泳,用Assign 4.7.1分析软件判定基因型。结果:HLA-DPA1及-DPB1基因的PCR扩增获得了清晰的目的条带,对其第2、第3外显子进行测序,所获的序列中无背景杂峰。用本文的方法对随机的96人份造血干细胞志愿捐献者标本进行HLA-DPB1测序分型,与采用SeCore~(TM) DPB1商品化测序分型试剂盒平行对照检测的结果相一致。结论:本文的方法在群体遗传学及疾病关联研究等领域具有广泛的使用价值。