Western blot方法检测胞质中细胞色素C含量的改进

目的探讨用Western blot技术检测胞质中细胞色素C（Cyt C）的最佳转膜时间。方法取大鼠小肠上皮细胞,提取胞质蛋白。蛋白定量后,取20μg样品上样于聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。取22μm孔径硝酸纤维素膜（NC膜）,电压100 V,分别电转移15、30、60、90、120 min。NC膜用丽春红染色,蒸馏水漂洗后加入Cyt C一抗、二抗孵育,放射自显影显色。结果在转膜过程中,随着时间的增加,转移到NC膜的总蛋白增多;而Cyt C条带出现了先增加（30 min）,后减少,再增加（120 min）的趋势。结论 Cyt C虽然是小分子量蛋白,但Western blot的转膜时间并不需要减少,相反要增加到120 min才能得到最佳效果。