融合蛋白ScFv(3G11)-mms13在大肠杆菌中的表达及鉴定 |
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引用本文: | 邢秋翠,孔登,纪国强,杨柳青,王小柯,崔楠.融合蛋白ScFv(3G11)-mms13在大肠杆菌中的表达及鉴定[J].潍坊医学院学报,2013(6):407-410. |
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作者姓名: | 邢秋翠 孔登 纪国强 杨柳青 王小柯 崔楠 |
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作者单位: | [1]潍坊医学院生物化学与分子生物学教研室,山东潍坊,261053 [2]95905部队场站卫生队,山东潍坊,261053 |
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基金项目: | 山东省科技攻火资助课题(课题编号:2009GG10002079) |
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摘 要: | 目的:构建抗Ⅳ型胶原酶单链抗体基因ScFv与磁小体膜蛋白基因mms13融合基因的原核表达载体pET30a(+)-ScFv-mms13,在大肠杆菌中诱导表达并对融合蛋白进行初步鉴定。方法 PCR扩增融合基因ScFv-mms13,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后克隆入原核表达载pET30a(+)质粒,构建重组表达质粒。将重组质粒导入大肠杆菌DH5ɑ中,利用PCR、酶切筛选鉴定重组菌株。用异丙基疏代半乳糖苷( IPTG)诱导表达融合蛋白,通过改变IPTG浓度、诱导时间优化表达条件。表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot法进行鉴定。结果重组质粒经PCR、酶切、测序证实重组质粒pET30a(+)-ScFv-mms13构建成功。 SDS-PAGE电泳结果分析表明诱导菌株在43kDa左右处有明显异源蛋白表达,且确定了在IPTG终浓度为0.2mmol/L、诱导时间为6h时为表达稳定。对表达蛋白进行定位分析确定表达蛋白主要以包涵体形式存在,部分存在于可溶细胞质中。 Western blot结果实证该表达产物可与His-tag抗体发生特异性结合,提示为目的融合蛋白。结论成功构建pET30a(+)-ScFv-mms13表达载体并表达获得目的融合蛋白。
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关 键 词: | ScFv mms13 蛋白表达 SDS-PAGE Westernblot |
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