| miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究 |
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| 引用本文： | 童锦禄,徐锡涛,朱明明,陈翔,聂芳,冉志华,萧树东.miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2010,19(7). |
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| 作者姓名： | 童锦禄 徐锡涛 朱明明 陈翔 聂芳 冉志华 萧树东 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院附属仁济医院消化科,上海市消化疾病研究所,上海,200001 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，上海市科委重点实验室项目资助 |
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| 摘 要： | 目的探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用。方法首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证。将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养。运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况。结果测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中。TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍。细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13)μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12)μg/L。同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150μg/L:7.8%±1.7%vs5.4%±1.2%;300μg/L:33.6%±3.9%vs18.2%±4.7%)。结论成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性。
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| 关 键 词： | 结肠癌 耐药性 细胞凋亡 羟基喜树碱 |
The role of miR-506 in hydroxycampothecin resistant colon cancer cells |
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| TONG Jinlu,XU Xitao,ZHU Mingming,CHEN Xiang,NIE Fang,RAN Zhihua,XIAO Shudong.The role of miR-506 in hydroxycampothecin resistant colon cancer cells[J].Chinese Journal of Gastroenterology and Hepatology,2010,19(7). |
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| Authors: | TONG Jinlu XU Xitao ZHU Mingming CHEN Xiang NIE Fang RAN Zhihua XIAO Shudong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | miR-506 |
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