利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体

目的 构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体，最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠，为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型。方法 以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体（retrieving vector），应用λ噬菌体Red重组酶介导的缺口修复（gap-repair）方法，通过细菌内的同源重组克隆长度约为12 kb的小鼠胰岛素2（Ins2）基因组DNA，同时构建1个带有内部核糖体进入位点（IRES）序列、Cre重组酶序列和正负向筛选标记基因的微型打靶载体（mini-targeting vector），最后通过同源重组获得Ins2-Cre打靶载体。结果 以Ins2基因的第3外显子为靶点，成功构建了受内源性Ins2基因启动子严格调控的表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体。结论 成功构建了在胰岛β细胞中特 异性表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体，为获得胰岛β细胞中基因特异性敲除小鼠模型提供了关键材料。