| 小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究 |
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| 引用本文： | 沈 震,陈欢欢,张 浩,盛燕辉,杨 荣,孔祥清. 小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究[J]. 南京医科大学学报(自然科学版), 2012, 0(12): 1661-1665 |
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| 作者姓名： | 沈 震 陈欢欢 张 浩 盛燕辉 杨 荣 孔祥清 |
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| 作者单位： | 南京医科大学第一附属医院心内科,泰州市人民医院心内科,江苏 泰州 225300;南京医科大学第一附属医院内分泌科,江苏 南京 210029;南京医科大学第一附属医院心内科,江苏 南京 210029;南京医科大学第一附属医院心内科,江苏 南京 210029;南京医科大学第一附属医院心内科,江苏 南京 210029;南京医科大学第一附属医院心内科,江苏 南京 210029 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年科学基金(30901473) |
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| 摘 要： | 目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系?方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ?BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆?将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达?以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量 RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系?结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确?载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率?转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P < 0.05)?结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化?
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| 关 键 词： | 先天性心脏病 NOMO1基因 RNA干扰 RNA干扰载体 P19细胞 |
| 收稿时间： | 2012-05-27 |
Construction and function of mouse NOMO1 RNA interference vector |
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| SHEN Zhen,CHEN Huan-huan,ZHANG Hao,SHENG Yan-hui,YANG Rong and KONG Xiang-qing. Construction and function of mouse NOMO1 RNA interference vector[J]. Acta Universitatis Medicinalis Nanjing, 2012, 0(12): 1661-1665 |
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| Authors: | SHEN Zhen CHEN Huan-huan ZHANG Hao SHENG Yan-hui YANG Rong KONG Xiang-qing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | congenital heart disease NOMO1 gene RNA interference RNAi vector P19 cell |
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