胸腺肽β4对氧化应激诱导的脊髓源性神经干/祖细胞损伤的作用及机制

目的：探讨胸腺肽β4（thymosin beta 4，Tβ4）在过氧化氢（hydrogen peroxide，H₂O₂）诱导的脊髓源性神经干/祖细胞（neural stem/progenitor cells，NSPCs）氧化应激损伤中的作用及机制。方法：分离Sprague-Dawley （SD）成年雄性大鼠中的原代NSPCs，将其分为对照组（未处理的NSPCs细胞），H₂O₂处理组（500 μM H₂O₂损伤的NSPCs细胞），Tβ4处理3组（H₂O₂处理组基础上分别用1、2.5、5 μg/ml Tβ4处理的NSPCs细胞），TAK-242处理组H₂O₂处理组基础上用Tβ4（5 μg/ml）和Toll样受体4（Toll-like receptors 4，TLR4）抑制剂TAK-242处理的NSPCs细胞]。采用髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）过表达慢病毒感染NSPCs细胞，构建MyD88过表达细胞系，并经H₂O₂和Tβ4处理。qRT-PCR和Western blot检测Tβ4，TLR4，MyD88的表达水平；MTT法和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）试剂盒检测细胞活力；采用Fluo-3/AM探针法检测细胞内Ca²⁺水平；流式细胞术和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）和Caspase-9试剂盒检测细胞凋亡水平；相应试剂盒分别检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量，超氧化物歧化酶（superoxi dedismu-tase，SOD）活性和谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量。酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素（interleukin，IL）-6和IL-1β的含量。结果：H₂O₂损伤的NSPCs中Tβ4的表达降低（P<0.05）。与H₂O₂处理组相比，Tβ4处理3组和TAK-242处理组NSPCs的细胞活力、Ca²⁺浓度显著增加（P<0.05），LDH释放量、细胞凋亡显著减少（P<0.05），ROS和促炎细胞因子的生成显著减少（P<0.05），TLR4和MyD88蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。MyD88过表达后NSPCs细胞活力，SOD活性和GSH含量降低，LDH释放量、细胞凋亡显著增加（P<0.05）；而MyD88过表达后NSPCs经Tβ4处理后，细胞活力、SOD活性和GSH含量升高，LDH释放量以及细胞凋亡降低（P<0.05）。结论：Tβ4通过抑制TLR4，MyD88途径减轻H₂O₂诱导的NSPCs氧化应激、凋亡和炎症等损伤。

Effect and mechanism of thymosin beta 4 on spinal cord-derived neural stem/progenitor cell injury induced by oxidative stress