糖基化终产物对血管平滑肌细胞表型转换作用与机制研究

目的探讨糖基化终产物(AGEs)对血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换的作用与机制。方法采用木瓜蛋白酶法分离大鼠胸主动脉VSMCs进行培养传代,免疫组织化学方法鉴定收缩表型,即标记蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),取收缩表型的VSMCs进行AGEs孵育,应用免疫组织化学方法、RT-PCR方法和蛋白印迹法观察不同浓度梯度及时间梯度的AGEs对VSMCs表型变化的影响。以AGEs干预的VSMCs作为对照,分别设AGEs+TRAM34组、AGEs+3-MA组、AGEs+PD98059组、AGEs+SB203580组、AGEs+LY294002组。采用RT-PCR方法和蛋白印迹法测定K_(Ca)3.1 mRNA及蛋白表达、微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA及蛋白表达。结果选取第5代大鼠胸主动脉VSMCs作为本实验研究对象。其中,α-SMA mRNA及蛋白均随着AGEs孵育浓度的增加而下降,且任意浓度AGEs孵育后α-SMA随时间进展而下降。AGEs干预组12 h时的K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白表达均显著高于其他6组;24 h时,AGEs干预组K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白显著上升,其他6组K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRN、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白则显著下降,且AGEs干预组24 h时的K_(Ca)3.1 mRNA、LC3 mRNA、K_(Ca)3.1蛋白、LC3蛋白表达均显著高于其他6组,组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AGEs可促进VSMCs表型由收缩型向合成型转换,但这一机制可被TRAM-34、自噬抑制剂3-MA、ERK1/2阻断剂PD98059、p38MAPK阻断剂SB203580和PI3K阻断剂LY294002所抑制。