化学合成siRNA对原代皮层神经元NgR表达的抑制效应

目的:了解化学合成siRNA对原代培养神经元NgR表达的抑制效果和对细胞的毒性作用。方法:实验于2005-03/07在上海市消化疾病研究所进行。①取怀孕16d的SD大鼠3只进行大鼠原代皮层神经元培养。②化学合成一段针对大鼠NgR基因编码区的siRNA,用阳离子脂质体转染大鼠皮层神经元。③分别于转染前、转染后24,48,72,96h行反转录-聚合酶链反应检测NgRmRNA水平;转染后48h行免疫细胞化学检测NgR表达的变化;碘化丙啶染色检测转染后各时间点神经细胞的存活情况。结果:①转染siRNA后24h和48hNgRmRNA水平明显下降,到72h明显回升,转染后96hNgRmRNA水平与转染前已无显著差异。②与转染无关序列oligo的细胞相比,转染siRNA的细胞其NgR表达明显下降。③碘化丙啶染色显示转染后24和48h,用脂质体转染的细胞(包括转染siRNA、无关序列Oligo和单纯脂质体组)其碘化丙啶阳性率与非转染对照组无明显差异,而转染后72和96h碘化丙啶阳性率显著高于未转染组[siRNA组为(12.57±0.69)%和(13.60±0.61)%;无关序列组为(12.64±0.47)%和(13.61±0.37)%;脂质体组为(12.59±0.29)%和(14.08±0.31)%;未转染组为(8.41±0.16)%和(8.40±0.71)%;P<0.05]但在各时间点,脂质体转染的各组间碘化丙啶阳性率不存在明显差异。结论:化学合成siRNA能有效抑制原代皮层神经元的NgR表达,并于短期内维持于低水平。该段siRNA转染的毒性作用主要来自于转染试剂,与序列本身无明确关系。

Inhibitive effect of chemically synthetic siRNA on the expression of NgR in primary cortical neurons