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CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究
引用本文:刘新莉,陈洋,马萍. CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体的构建及体外表达的研究[J]. 中国医科大学学报, 2009, 38(7): 493-496
作者姓名:刘新莉  陈洋  马萍
作者单位:中国医科大学,附属第一医院肿瘤研究所,沈阳,110001
基金项目:辽宁省自然科学基金资助项目
摘    要:目的 构建钙网织蛋白/黑素瘤抗原基因-A3(CRT/MAGE-A3)双基因重组腺病毒载体,并进行体外表达研究.方法 从表达质粒pcDNA3/CRT中切取目的片段CRT,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV.根据Genbank中提供的黑素瘤基因序列,设计并合成引物,以人肺癌组织cDNA文库为模板采用RT-PCR技术扩增人黑素瘤抗原基因-A3基因片段,测序后将黑素瘤抗原基因-A3基因片段定向克隆至穿梭载体,进而将穿梭载体克隆至Pac Ⅰ限制性内切酶线性化的腺病毒载体pAdxsi.结果 目的 片段CRT转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(△GFP)-CRT正确.人肺癌组织经RT-PCR扩增出大小约950 bp的基因片段,测序证实为MAGE-A3 DNA后,克隆至穿梭载体pShutde-(△GFP)-CRT构建穿梭载体pShuttle-CRT-MAGE-A3,酶切鉴定证实构建正确.酶切穿梭载体将双基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-CRT/MAGE-A3病毒载体,酶切鉴定证实构建成功.转染293LP细胞并用Western blot检测到其体外表达.结论 成功构建CRT/MAGE-A3重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达CRT蛋白及MAGE-A3蛋白.

关 键 词:钙网织蛋白  黑素瘤抗原基因-A3  腺病毒  基因治疗

Construction and Expression of Recombinant Adenovirus for CRT/MAGE-A3
LIU Xin-li , CHEN Yang , MA Ping. Construction and Expression of Recombinant Adenovirus for CRT/MAGE-A3[J]. Journal of China Medical University, 2009, 38(7): 493-496
Authors:LIU Xin-li    CHEN Yang    MA Ping
Abstract:
Keywords:
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