Blast-病毒物种鉴定的新方法

采集自愿献血员中56份HCV-Ab阳性血样，常规分离血清。应用RT-nPCR对HGV-NS3区进行核酸扩增，PCR扩增产物与PMD18-T载体连接，转染DH5d工程菌株，挑选白色菌落，经内套PCR验证克隆阳性者，以碱裂解法提取质粒DNA，应用荧光染料Bignye标记、Sanger双脱氧末端终止法进行重组DNA的核酸序列测定。将测得的核酸序列，经国际互联网络输入到NCBI的GenBank数据库的局部序列相似形查询(Blast)的查询框中，借助于GenBank数据库中的资料和计算机分析程序中的BlastN软件，与数据库中所有已知的核酸序列进行序列同源性比对搜索分析。