突变型低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及常氧表达

目的 为了在常氧条件下观察低氧诱导因子-1α( HIF-1 α)在骨缺损部位促新血管生成作用,构建能够同时表达突变型HIF-1α和人源化绿色荧光蛋白(hrGFP)的腺病毒载体并检测其在兔骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法 利用聚合酶链式反应(PCR)定点突变人HIF-1α编码区(CDS)第402、564和803位氨基酸,将突变后HIF-1α和hrGFP重组入pAdEasy-1系统,包装病毒并测定滴度。以感染复数(MOI)=100将腺病毒转染MSCs,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染细胞中HIF-1αmRNA和蛋白表达。结果 (1)第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸。(2)A、B两组HIF-1α mRNA表达量明显高于C、D两组,差异有统计学意义(P＜0.01);A组HIF-1α蛋白表达量明显高于其他3组,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 (1)腺病毒载体Ad-HIF-1 αmu-IRES-hrGFP-1构建成功。(2)突变后HIF-1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。