| 摘 要： | 目的 沪地龙3个基原药材（通俗环毛蚓Pheretima vulgaris、威廉环毛蚓P. guillelmi、栉盲环毛蚓P. pectinifera）在外观性状方面相似度高,传统鉴定方法难以有效区分,通过建立多重位点特异性PCR方法同时鉴别沪地龙3个基原。方法 通过比对沪地龙和其他7个蚯蚓品种线粒体全基因序列的多态性位点差异,分别设计通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物,建立单基原反应体系,并对耐受性和适用性进行考察和验证;而后优化特异性引物组合,构建多重位点特异性PCR鉴别体系;反应体系为25 μL：2×Rapid Taq Master Mix 12.5 μL,引物1.5 μL（通俗环毛蚓∶威廉环毛蚓∶栉盲环毛蚓＝1∶1.2∶0.8）,DNA模板0.5 μL（50 ng/μL）,灭菌水补足至25 μL。PCR扩增条件：95 ℃预变性4 min;95 ℃变性15 s,60 ℃退火15 s,72 ℃延伸20 s,循环33次;产物末端72 ℃延伸7 min。结果 通俗环毛蚓可得到535 bp条带,威廉环毛蚓可得到219 bp条带,栉盲环毛蚓可得到435 bp条带,其他品种蚯蚓样品均无条带。结论 多重位点特异性PCR鉴别体系可根据条带位置同时鉴别沪地龙3个基原。该方法可用于沪地龙基原和真伪鉴别,并为地龙的质量控制和研究提供参考。
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