| 应用细菌同源重组法快速构建和制备重组腺病毒 |
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| 引用本文： | 李红乐,秦清和,王静珍,邓鹏,李树浓,姜勇.应用细菌同源重组法快速构建和制备重组腺病毒[J].中国病理生理杂志,2002,18(11):1451-1454. |
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| 作者姓名： | 李红乐 秦清和 王静珍 邓鹏 李树浓 姜勇 |
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| 作者单位： | 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室，广东 广州 510515；中山大学中山医学院病理生理学教研室，广东 广州 510080 |
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| 基金项目： | 国家杰出青年科学基金资助项目 (No.3992 50 1 4 )，国家自然科学基金资助项目(No.30 0 30 0 60，39870 332，3980 0 0 74) |
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| 摘 要： | 目的：利用大肠杆菌细菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度重组病毒。方法：自细胞周期相关激酶真核表达载体pCR31-CCRK中酶切出CCRK基因，亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中，形成转移质粒pAdTrack-CMV-CCRK，采用电穿孔或化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组，得到重组腺病毒载体pAd-CCRK。以pAd-CCRK为模板，经DNA测序正确后，用Pac Ⅰ酶切线性化pAd-CCRK，转染293细胞，包装成重组病毒颗粒，荧光显微镜观察转染细胞EGFP的表达，采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定。将重组病毒上清感染RAW细胞，荧光显微镜下观察感染细胞重组病毒的表达。结果：成功地构建了携带CCRK基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒，重组病毒能在体外高效表达。结论：应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体，可高效制备均一的高滴度重组病毒，为CCRK基因功能的研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 腺病毒 同源重组 荧光蛋白 |
| 文章编号： | 1000-4718(2002)11-1451-04 |
| 收稿时间： | 2002-01-29 |
| 修稿时间： | 2002年1月29日 |
Construction of recombinant adenovirus vector by bacterial homologous recombination and generation of its recombinant adenovirus |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Adenoviruses Homologous recombination Fluorescent protein |
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