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| 缺失线粒体DNA的人喉癌细胞系的建立 | |
| 作者姓名： | 王磊 程鹤香 赵倩 陈鸥 赵明 |
| 作者单位： | 1. 吉林大学第二医院 耳鼻咽喉科,吉林 长春130041 2. 佳木斯市中心医院 耳鼻咽喉科 |
| 摘 要： | 目的为了研究线粒体DNA在人喉癌细胞的增殖、分化及凋亡中的影响及作用,培养线粒体DNA缺失的喉癌细胞系,为构建融合喉癌细胞,研究线粒体DNA突变和线粒体功能改变与喉癌发生之间的关系奠定基础.方法人喉癌细胞系JHUo11加入10%FBS的RPMI1640培养基中,然后在培养基中加入丙酮酸、尿苷、溴化乙锭(EtBr)以去除线粒体DNA,不加溴化乙锭的o11细胞作为对照.经过90天培养,线粒体DNA缺失的喉癌细胞通过健那绿染色后光镜观察和PCR法鉴定.结果 o11细胞经过75ng/μl溴化乙锭持续作用90天后可见细胞肿胀变圆,透光度增加,线粒体DNAPCR扩增未见目的条带,细胞可扩增出定位于mtDNA的500bp片段,健那绿染色对照细胞,可见散在蓝绿色线粒体,而加EB的细胞未见线粒体.结论喉癌细胞o11经过溴化乙锭持续作用90天培养出线粒体DNA缺失的ρ0o11喉癌细胞,这种缺失线粒体DNA的细胞系需补充外源性丙酮酸和尿苷来维持其生存,否则细胞很快死亡.通过观察细胞的增殖和分化发现,ρ0o11细胞生长速度比未经EB处理的对照组慢的多. |
| 关 键 词： | 线粒体DNA 无线粒体喉癌细胞系 溴化乙锭 细胞培养 |
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