| 中性粒细胞胞外诱捕网生成和降解方法的建立和评价 |
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| 作者姓名： | 李金龙 张译丹 周欣 姬文婕 赵季红 魏路清 李玉明 |
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| 作者单位： | 天津医科大学研究生院;天津市心血管重塑与靶器官损伤重点实验室;武警后勤学院附属平津医院心脏中心;心血管病研究所;武警后勤学院附属平津医院呼吸与重症医学科; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81102088,81170238,81070121);天津市自然科学基金(12JCYBJC16600,11JCYBJC12000,09ZCZDSF04200) |
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| 摘 要： | 目的中性粒细胞胞外诱捕网(NET)是近年来新发现的与自身免疫性疾病和血栓形成有关的结构,本研究拟建立一种评价NET体外生成和降解的方法。方法通过Ficoll-Histopaque密度梯度离心法从健康人外周血分离中性粒细胞,利用佛波酯(PMA)诱导其产生NET,免疫荧光细胞化学染色和琼脂糖凝胶电泳验证NET的形成,PicoGreen dsDNA染色结合荧光强度进行定量分析,研究DNA酶(DNaseⅠ)和健康人血清对NET的降解。结果 Ficoll密度梯度离心法分离的中性粒细胞纯度达到95%。激光共聚焦显微成像显示NET网状结构主要由DNA和组蛋白组成,琼脂糖凝胶电泳显示NET的DNA条带大小超过10 000 bp。DNase和健康人血清均可降解体外诱导的NET,但程度不同。结论本实验成功建立了人NET体外诱导生成和降解的方法。
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| 关 键 词： | 中性粒细胞 中性粒细胞胞外诱捕网 佛波酯 |
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