miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖 |
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引用本文: | 韩继明,霍满鹏,慕明涛,刘俊俊,张静.miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(6). |
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作者姓名: | 韩继明 霍满鹏 慕明涛 刘俊俊 张静 |
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作者单位: | 延安大学医学院; |
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基金项目: | 陕西省科学技术研究发展计划(2011K13-02-06) |
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摘 要: | 目的研究miR-497在宫颈癌HeLa细胞中对细胞周期蛋白E1(CCNE1)的靶向作用及其对HeLa细胞增殖的影响。方法构建pre-miR-497、CCNE1野生型(WT-CCNE1)和突变型(MT-CCNE1)真核表达载体,采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)验证pre-miR-497载体的有效性,采用MTT法检测miR-497对HeLa细胞增殖的影响,采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR和Western blot法验证miR-497对CCNE1的靶向关系。结果测序结果提示pcDNATM6.2-GW-pre-miR-497、pmirGLO-CCNE1野生型和突变型表达载体构建成功,qRT-PCR证明转染pre-miR-497的HeLa细胞miR-497的表达显著升高。MTT法结果显示转染pre-miR-497的HeLa细胞增殖活性显著低于阴性对照miR组(P0.05)。此外,双萤光素酶法检测共转染pre-miR-497和WT-CCNE1的HeLa细胞,其萤光素酶活性显著低于对照组(P0.01),qRT-PCR及Western blot法也分别证实转染pre-miR-497的HeLa细胞其CCNE1的mRNA和蛋白水平显著下调(P0.05)。结论 miR-497能够通过靶向CCNE1调控宫颈癌HeLa细胞的增殖活性。
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关 键 词: | 宫颈癌 miR- CCNE 增殖 |
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