肝素结合血凝素通过抑制A549细胞的自噬作用增强耻垢分枝杆菌的感染能力 |
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引用本文: | 郑青,杨柳,杨静,周珊,周磊,韩若冰,郝晓柯,马越云.肝素结合血凝素通过抑制A549细胞的自噬作用增强耻垢分枝杆菌的感染能力[J].细胞与分子免疫学杂志,2014(7). |
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作者姓名: | 郑青 杨柳 杨静 周珊 周磊 韩若冰 郝晓柯 马越云 |
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作者单位: | 第四军医大学西京医院检验科; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(30872358) |
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摘 要: | 目的将肝素结合血凝素(HBHA)重组表达于耻垢分枝杆菌(MS),鉴定其对A549细胞自噬作用的影响。方法将HBHA克隆于穿梭表达质粒pMV261,构建HBHA重组载体,电转化至MS;感染A549细胞,Western blot法鉴定A549细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况,并检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的变化可估计自噬的水平;利用单丹磺酰尸胺(MDC)将自噬体染色后,激光共聚焦观察细胞内自噬体变化的情况;通过MS、rMS-HBHA感染A549细胞18 h,计算胞内活菌数,鉴定感染状况。结果 rMS-HBHA经42℃热诱导成功表达HBHA蛋白;相对野生型MS,重组表达HBHA蛋白的MS(rMS-HBHA)可以显著抑制A549细胞中的LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的表达,rMS-HBHA组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值为0.625显著低于MS组2.025,表明rMS-HBHA组自噬体形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549细胞18 h后胞内活菌为6.3×106,明显高于MS组1×105。结论外源性HBHA可以通过抑制A549细胞的自噬作用增强MS的感染能力。
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关 键 词: | rMS 肝素结合血凝素 A细胞 LC 耻垢分枝杆菌 |
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