rhTNF-α对成骨向分化前后的人脂肪基质细胞分泌血管生成相关生长因子的影响

目的：研究在重组人肿瘤坏死因子（recombinant human tumor necrosis factor alpha，rhTNF-α）刺激下人脂肪基质细胞（human adipose tissue-derived stromal cells, hADSCs）增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor-2，FGF-2）和胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1，IGF-1）分泌的变化。方法：采用吸脂术获得的第4代hADSCs，以终浓度为0、1、5、10、50、100 μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs，分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响；并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs，24 h后收集上清，以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况；在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清，ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化，收集细胞上清前24 h更换培养基，并在相应孔中加入rhTNF-α，使其终浓度为10 μg/L。所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正。结果：rhTNF-α能促进hADSCs的增殖，其作用表现为一定的浓度和时间依赖。相比于对照组，48 h时，10 μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显，但96 h时则表现为促进作用（P<0.01），而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用（P<0.01），96 h时则表现为明显的促进作用（P<0.01）。相对于对照组，rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1（P<0.01）；hADSCs经成骨向诱导后，上述3种生长因子的分泌有增加的趋势；不同成骨向分化阶段的hADSCs用10 μg/L rhTNF-α刺激后，在诱导第1天，rhTNF-α显著促进VEGF的分泌（P<0.01），但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响；在诱导第3天和第7天，rhTNF-α对VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF-1（P<0.05）的分泌均有促进作用；但在第14天则抑制VEGF（P<0.01）、FGF-2（P<0.05）和IGF（P<0.05）的分泌。结论：一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用；hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖；在不同成骨向分化阶段，rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同。