基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路研究右美托咪定对肝癌切除术大鼠免疫功能的影响

摘 要：［目的］ 基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨右美托咪定对肝癌切除术大鼠免疫功能的影响。［方法］ 采用肝包膜下植入肝癌组织建立大鼠原位肝癌模型，并以随机数字表法将24只原位肝癌SD大鼠分为对照组（C组）和右美托咪定低、中、高剂量组（DL组、DM组、DH组），每组6只大鼠。右美托咪定组大鼠于麻醉诱导前15min内静脉输注右美托咪定，麻醉诱导插管后，持续静脉输注右美托咪定至实验结束，对照组则静脉输注等量生理盐水。各组分别于术前（T0）、术后2d（T1）和术后5d（T2）采集尾静脉血。采用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平，计算CD4+/CD8+；采用ELISA法检测血浆白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）及干扰素-γ（IFN-γ）的浓度；T2取血后，处死大鼠，观察脾组织病理变化，并运用Western blot检测脾组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达。［结果］在T1和T2时，DH组CD3+、CD4+T细胞数量均比C组显著提高(T1：45.80±8.95 vs 26.03±8.45，P＜0.05；19.73±3.23 vs 10.00±2.95，P＜0.01；T2：45.70±5.41 vs 23.77±5.98，15.30±3.15 vs 8.73±2.80，P均＜0.05)，CD8+ T细胞数量则降低，但无显著差异(P>0.05)。IL-2、IL-17A和IFN-γ水平显著提高(T1：53.72±1.32 vs 51.89±1.19，P<0.05；225.16±2.46 vs 216.80±2.77，P＜0.01；1 556.02±20.72 vs 1 528.55±19.77，P<0.05；T2：53.30±1.35 vs 49.93±1.28，P＜0.01；223.57±2.55 vs 211.42±2.61，P<0.01；1 553.81±21.24 vs 1 524.72±15.65，P<0.05)，IL-10水平降低(T1：145.56±1.50 vs 155.36±1.19；T2：148.51±1.39 vs 166.26±2.12，P均＜0.01)。与T0时比较，各组在T1、T2时CD3+、CD4+T细胞数量均降低，CD4+/ CD8+升高，CD8+T细胞数量升高。T2时，C组和DL组的IL-2、IL-17A水平均显著降低（C组：49.93±1.28 vs 56.02±0.98，211.42±2.61 vs 226.77±2.59，P均＜0.01；DL组：50.77±0.83 vs 55.02±1.13，P＜0.01；219.67±2.03 vs 225.82±2.64，P<0.05），IL-10水平显著升高（166.26±2.12 vs 146.28±1.50，155.40±1.57 vs 143.59±1.19，P均＜0.01），各组在T1、T2时IFN-γ水平无显著变化。病理结果显示，与C组相比，右美托咪定组脾脏中成熟淋巴细胞数量增加，白髓面积相对扩大。Western blot结果显示，右美托咪定呈剂量依赖性显著下调TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达。［结论］ 右美托咪定可改善原位肝癌切除术大鼠术后细胞免疫功能抑制，可能是通过阻碍TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活而发挥免疫调节作用。