| 副溶血性弧菌致病性标志基因tdh的实时荧光定量聚合酶链式反应的建立 |
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| 引用本文： | 王宏萍,周晓明,张继伦,姜婷,李雯雯,鲍依稀. 副溶血性弧菌致病性标志基因tdh的实时荧光定量聚合酶链式反应的建立[J]. 医学争鸣, 2008, 29(24): 2232-2235 |
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| 作者姓名： | 王宏萍 周晓明 张继伦 姜婷 李雯雯 鲍依稀 |
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| 作者单位： | [1]重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室,免疫学教研室,重庆400016 [2]复旦大学附属上海市公共卫生临床中心,上海201508 [3]上海市出入境检验检疫局,上海201202 |
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| 基金项目： | 上海市科委标准化基金 ， 上海市申康平台共享项目平台资助 |
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| 摘 要： | ![]()
目的:建立一个用于副溶血性弧菌致病性定量测定的检测体系.方法:以多组tdh基因的保守序列为基础,设计实时荧光定量PCR扩增适用的引物和TaqMan探针.以定量方式提取副溶血性弧菌基因组DNA,以tdh+菌株为阳性对照,建立实时荧光定量PCR方法.以tdh荧光定量结果与绝对菌数浓度作参比,以确定tdh基因在菌群中的拷贝水平.结果:使用正向序列5-GGAAG ATGTT TATGG TCAAT C-3(位置在467～487 bp处),反向序列5-ACCGC TGCCA TTG-TA TAGTC T-3(位置在571～551 bp处),TaqMan探针5-FAM-TGACA TCCTA CATGA CTGTG AAC-ECLIPSE-3(位置在517～539 bp处)建立一个实时荧光定馈PCR反应,目的片段长度105 bp.建立反应的DNA拷贝数对数值与Ct值线性关系为γ=-3.144 logx+43.229(r=0.997,P<0.001).建立了菌液A值与显微镜下绝对菌数浓度的相关关系为γ=2.0452x+6.2845(r=0.7828,P<0.01).根据tdh基因拷贝数与绝对菌数相比可计算tdh基因的单菌体拷贝量.结论:建立了一个定量副溶血性弧菌tdh基因拷贝水平的实时荧光定量PCR检测方法,可应用于副溶血性弧菌致病性的标准化定量测定体系.
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| 关 键 词： | 弧菌,副溶血性 聚合酶链反应 tdh基因 |
Construction of a real-time polymerase chain reaction for quantitating thermo-stable-direct-hemolysin gene, an etiological gene-marker of pathogenic Vib-rio parahaemolyticus |
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| Abstract: | ![]()
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