人载脂蛋白Eε3等位基因的克隆及表达

目的:克隆人载脂蛋白E（ApolipoproteinE,APOE）ε3等位基因,测定序列,并构建带有人源性APOEε3等位基因的真核表达载体。方法:通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）从人胎儿脑组织中克隆得到APOEε3等位基因,与PMD19-T载体连接,再酶切PMD19-T-APOEε3,获得APOEε3基因,然后将其与表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体。重组质粒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用Western-Blot的方法检测目的蛋白在293T细胞中的表达。结果:经酶切和DNA测序证明APOEε3基因序列正确,真核表达载体构建成功。将重组质粒转染293T细胞,在转染后的细胞中检测到目的蛋白的表达。结论:成功构建了pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体,该表达载体能在真核细胞中正确表达。