含P6A寡肽血液的HPLC分离分析

目的：建立可用于寡肽血液浓度测定并可与ESI-MS对接的HPLC方法。方法：以ARPAK溶栓寡肽为模型化合物，考察其对色谱系统的稳定性，选择适宜的洗脱系统，消除寡肽与血浆蛋白的相互作用，确定柱温与寡肽峰面积及保留时间的关系，寻找血液中寡肽降解酶抑制剂，比较不同的填料对从血液中提取寡肽的影响，优化寡肽柱前衍生化的温度、时间、pH环境和试剂。结果：含ARPAK的小鼠血浆在50℃、pH8．5的条件下与丹酰氯反应70min，衍生化程度可达峰值。含ARPAK的血浆溶液丹酰氯衍生化后用HClO4处理，可以有效地使被测的丹酰氯衍生化的ARPAK从蛋白中游离。pH9．4的磷酸盐缓冲溶液可以有效地阻滞ARPAK在任意时刻的降解。采用自装的XAD-2柱，可以定量从鼠血浆中回收ARPAK。ARPAK在A相为pH2．1磷酸盐缓冲液，B相为乙腈的流动相中显示最佳的分离度。室温进样，20％A：80％B至45％A：55％B，10min；45％A：55％B至70％A：30％B，1min，丹酰氯衍生化ARPAK的保留时间为11．77min，检测限为10ng。结论：上述HPLC条件以及样品前处理方法可用于寡肽血样HPLC/ESI-MS研究。

HPLC analysis of ARPAK in plasma