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| SARS冠状病毒N蛋白的克隆与表达 | |
| 引用本文： | 袁仕善,吴少庭,秦莉,黄达娜,张仁利,高世同,余新炳. SARS冠状病毒N蛋白的克隆与表达[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2004, 24(7): 552-555 |
| 作者姓名： | 袁仕善 吴少庭 秦莉 黄达娜 张仁利 高世同 余新炳 |
| 作者单位： | 1. 深圳市疾病预防控制中心;中山大学 2. 深圳市疾病预防控制中心 3. 华中科技大学同济医学院 4. 中山大学 |
| 摘 要： | 目的 克隆和表达SARS冠状病毒N蛋白 ,并分析其免疫学活性。方法 采用RT PCR从SARS冠状病毒RNA中扩增出编码N蛋白的基因 ;经克隆和测序分析后 ,亚克隆至表达载体pGEX 4T 2 ,转化大肠杆菌JM10 9,PCR和双酶切鉴定 ;阳性菌株经IPTG诱导 ,SDS PAGE分析 ;大量诱导表达N蛋白 ,亲和层析予以纯化 ;免疫印迹分析纯化蛋白对SARS的诊断效果 ;用纯化的融合蛋白免疫小鼠观察其诱导的抗体应答。结果 RT PCR扩增出N蛋白基因的特异片段 ,获得的阳性克隆序列与Gen Bank中登录的SARS冠状病毒的N蛋白基因序列同源性为 99.8% ;N蛋白基因被亚克隆到表达载体pGEX 4T 2 ,在JM10 9中表达了N蛋白 ,表达的蛋白经亲和层析获得纯化 ;纯化蛋白能被SARS病人血清识别 ;免疫小鼠诱导产生了高滴度的抗体。结论 成功构建了SARS冠状病毒N蛋白的重组表达质粒 ,在大肠杆菌中表达的N蛋白融合蛋白具有良好的免疫学活性。 |
| 关 键 词： | SARS 冠状病毒 N蛋白 表达 纯化 |
| 修稿时间： | 2003-11-05 |
Cloning and expression of nucleocapsid protein of SARS coronavirus |
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| YUAN Shi-shan ,WU Shao-ting,QIN Li,HUANG Da-na,ZHANG Ren-li,GAO Shi-tong,YU Xin-bing. Shenzhen Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen ,China. Cloning and expression of nucleocapsid protein of SARS coronavirus[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2004, 24(7): 552-555 | |
| Authors: | YUAN Shi-shan WU Shao-ting QIN Li HUANG Da-na ZHANG Ren-li GAO Shi-tong YU Xin-bing. Shenzhen Center for Disease Control Prevention Shenzhen China |
| Affiliation: | YUAN Shi-shan *,WU Shao-ting,QIN Li,HUANG Da-na,ZHANG Ren-li,GAO Shi-tong,YU Xin-bing. *Shenzhen Center for Disease Control and Prevention,Shenzhen 518020,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | SARS Coronavirus Nucleocapsid protein Expression Purification |
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