腺病毒重组绿色荧光蛋白转染兔脂肪干细胞的体外研究

目的 通过采用腺病毒重组绿色荧光蛋白(Ad-EGFP)转染连续培养的家兔脂肪组织来源基质干细胞(ADSCs),检测其转染效率、最佳标记时间,探讨其作为干细胞标记示踪方法的可行性.方法 选择8～12周龄健康新西兰大白兔6只,雌雄不限,体质量1.5～2.5kg;切取6只兔腹股沟皮下脂肪组织1～2ml,采用贴壁法行体外分离培养ADSCs;将获取的第4代ADSCs进行流式细胞术表型鉴定和不同MOI值Ad-EGFP基因转染,同时通过活力和增殖实验进行Ad-EGFP体外转染对ADSCs的影响研究.结果 6份标本均成功培养出兔ADSCs且生长良好,并均成功进行了Ad-EGFP基因转染.①原代细胞培养48h后可见细胞贴壁生长,其ADSCs形态主要为宽大、扁平、短梭形细胞,传代后细胞形态主要为长梭形.经1:2传代后细胞增殖速度明显加快,3d后细胞已长满培养瓶底后,即可传代.②ADSCs倍增时间约72h.③第4代的ADSC表型呈CD29+,CD34-,CD44+,CD106-,CD133-和HLA-DR-.④Ad-EGFP可成功转入ADSCs.24h可见绿色荧光,5d时荧光表达强度最强;ADSCs传代后仍有强荧光表达.当MOI值为0、10、20、30、50、100时,转染率分别为0,11.2%,25.8%,46.7%,95.3%,97.2%.⑤转染组和未转染组细胞培养1、3、5、7、9、11d时,其细胞活力、增殖分化的差异均无统计学意义.结论 能大量从兔脂肪组织分离培养出基质干细胞;EGFP可成功转染ADSCs,其MOI值为50时较为理想.所以,腺病毒是较好的基因载体,而EGFP转染是一种较好的兔ADSCs标记方法.

Study of rabbit adipose tissue-derived stem cells by transfection of recombinant adenovirus/EGFP in vitro