叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：观察长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响并分析其作用机制.方法：实验于2004—05／10在泰山医学院机能实验室完成。选择SPF级5周龄雄性Wistar大鼠62只，51只大鼠采用膳食诱导加小剂量链脲佐菌素制备2型糖尿病大鼠模型，并设立普通饲料饲养的大鼠11只为正常对照组。将2型糖尿病模型造模成功的37只大鼠随机数字表法分为模型对照组（12只）、小剂量叶酸组（12只）和大剂量叶酸组（13只）。补充叶酸11周后，剪尾采血分别检测血清一氧化氮（硝酸还原酶法）、超氧化物歧化酶（黄嘌呤氧化酶法）及丙二醛（硫代巴比妥酸法）水平；取心肌标本，采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的地高辛标记的duTP缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡，采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物法检测心肌组织Bcl-2，Bax和Fas蛋白表达。结果：纳入动物62只，造模成功37只，48只进入结果分析。①补充叶酸11周后，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠血清一氧化氮水平较模型对照组有明显增高[分别为（28．77土6．71），（29．62土6．55），（22．95土5．22）μnol／L，P均〈0．05]，血清超氧化物歧化酶水平亦较模型对照组有明显增高[分别为（6．15土0．64），（5．97土0．56），（5．27&;#177;0．94）nkat／L，P〈0．01，0．05]，而血清丙二醛水平较模型对照组明显降低[分别为（11．24&;#177;3．52），（10．97&;#177;4．59），（18．95&;#177;4．59）nmol／L，P均〈0．01]。（2）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较正常对照组明显增加[分别为（8．28&;#177;1．06）％。（4．25&;#177;0．63）％，（2．27&;#177;0．86）％，（0．72&;#177;0．37）％，P均〈0．01]，小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞凋亡率又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。（3）模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值（A）均较正常对照组明显增加（分别为230．15&;#177;4．50，236．24&;#177;7．75，241．58&;#177;5．83，224．51&;#177;3．01，P〈0．05或P〈0．01），小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显增加（分别为P〈0．05和P〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bel-2蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步增加（P〈0．05）；模型对照组、小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax，Fas蛋白阳性表达的平均吸光度值均较正常对照组明显增加（分别为234．76&;#177;5．66,226．73&;#177;7．24,220．16&;#177;5．44，214．38&;#177;5．23；247．25&;#177;6．29，239．09土6．10，233-43&;#177;7-41，226．29&;#177;4．70，P〈0．01或P〈0．05），但小剂量叶酸组及大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值均较模型对照组明显降低（P均〈0．01），大剂量叶酸组大鼠心肌细胞Bax蛋白阳性表达的平均吸光度值又较小剂量叶酸组进一步降低（P〈0．05）。结论：长期补充叶酸对2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡具有明显预防作用，它可明显上调心肌细胞凋亡抑制基因Bcl-2的蛋白表达并下调凋亡刺激基因Bax和Fas的蛋白表达；叶酸可能通过增加机体一氧化氮合成从而提高血清一氧化氮活性和提高机体抗氧化能力来预防2型糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的发生。

Influence of folic acid on myocardial apoptosis in rats with type 2 diabetes mellitus