| 铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶基因的克隆表达及生物学活性 |
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| 作者姓名： | 贾鸣 胡晓梅 孙卫忠 饶贤才 丛延广 胡福泉 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038;第三军医大学基础部微生物学教研室,重庆市微生物工程重点实验室,重庆,400038 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（30300295） |
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| 摘 要： | 目的克隆表达铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶基因并检测其活性. 方法应用PCR技术从铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组中扩增多糖解聚酶基因,将其克隆于原核表达载体pQE-31中,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,IPTG诱导表达;采用Ni-NTA柱亲和层析分离纯化目的蛋白;提取铜绿假单胞菌生物膜胞外多糖,观察目的蛋白对胞外多糖的降解活性. 结果采用PCR技术成功扩增了铜绿假单胞菌噬菌体PaP3多糖解聚酶基因,所构建的重组质粒经酶切及测序鉴定与设计序列一致;转化E.coli JM109后,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约为20.4×103,与理论预期值一致;破菌后电泳证实目的蛋白主要在上清中以可溶形式表达. 经Ni-NTA柱亲和层析后蛋白纯度大于95%. 初步活性检测结果表明重组PaP3多糖解聚酶蛋白对生物膜胞外多糖具有一定的降解作用. 结论重组噬菌体PaP3多糖解聚酶在体外可以特异性的降解铜绿假单胞菌的胞外多糖,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 假单胞菌 铜绿 细菌噬菌体 多糖解聚酶 生物膜 胞外多糖 克隆 分子 蛋白表达 |
| 文章编号： | 1000-2790（2008）02-0123-04 |
| 收稿时间： | 2007-08-28 |
| 修稿时间： | 2007-11-10 |
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