氯化锂通过激活Wnt信号通路促进内皮祖细胞的增殖能力

目的探讨糖原合酶激酶3β(GSK-3β)抑制剂氯化锂对内皮祖细胞增殖的作用机制。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓源性内皮祖细胞,体外培养7天后分别给予不同浓度氯化锂(5、10、20、40 mmol/L)以抑制内皮祖细胞的GSK-3β活性。分别采用镜下计数法及四氮唑溴盐比色法测定内皮祖细胞增殖能力,荧光激活细胞分离仪分析各组内皮祖细胞的细胞周期变化。采用蛋白印迹法测定Wnt信号通路中磷酸化GSK-3β、β-连环蛋白及细胞周期蛋白D1的蛋白表达。结果氯化锂在一定浓度范围内可剂量依赖性地增加内皮祖细胞数量。与对照组比较,不同浓度氯化锂组(5、10、20 mmol/L)内皮祖细胞数量显著增加(P0.05,n=5)。四氮唑溴盐比色法检测氯化锂各浓度组内皮祖细胞在490 nm处吸光度值与对照组比较差异有显著性(P0.05,n=5)。荧光激活细胞分离仪分析显示氯化锂组细胞周期S期较对照组显著增加(P0.05,n=3)。蛋白印迹法测定表明,与对照组比较氯化锂可显著增加磷酸化GSK-3β、β-连环蛋白及细胞周期蛋白D1的蛋白表达(P0.05,n=3)。结论 GSK-3β抑制剂氯化锂可通过激活Wnt信号通路显著促进内皮祖细胞的增殖能力。